脂肪乳注射液的粒度檢測及藥典標準

      ［摘要］分別采用動態光散射法( DLS) 、經典光散射法、基于單顆粒光學傳感技術的光阻法( LO /SPOS) 與電阻法，對脂肪乳注射液的乳粒進行考察，主要檢查粒徑分布及顆粒濃度。結果表明經典光散射法與動態光散射法( DLS) 測定乳粒的平均粒徑以及粒徑分布結果基本一致，LO /SPOS 測定大粒子(＞5μm) 的結果相較于電阻法(傳統計數器)更，優勢更加明顯。
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      1. 概念
      脂肪乳注射液又名脂肪乳注射液(C14～24)，是由注射用大豆油(14～24)個碳原子的脂肪酸構成的長鏈甘油三酯) 經注射用蛋黃卵磷脂乳化，并加注射用甘油制成的滅菌乳狀液體。為能量補充藥，為機體提供能量和必需脂肪酸，用于胃腸外營養補充能量及必需脂肪酸，預防和治療人體必需脂肪酸缺乏癥，也為經口服途徑不能維持和恢復正常必需脂肪酸水平的患者提供必需脂肪酸。注射用脂肪乳是一種良好的藥物載體，具有增強藥物穩定性，減少副反應，具備一定靶向性等優點，在臨床應用和研究開發領域發展迅速。
      乳粒大小和分布是脂肪乳注射液質量控制的核心內容，它和注射液的穩定性、有效性和安全性密切相關。
      2. 藥典標準
      我國脂肪乳注射液現行標準為《中華人民共和國衛生部標準》1998年版 2 部第 6 冊(生化藥品第1分冊) (簡稱部頒標準)和企業注冊標準(國家食品藥品監督管理局標準YBH13472008)。USP35版收載了脂肪乳注射液( lipid injectable emulsion)，是對所有乳劑的一個通用規定。在“乳粒”檢查項下，企業注冊標準與部頒標準一致，與USP35標準相比，差別較為明顯，尤其是在控制大粒子方面， 測定方法和限度都有明顯差異。國內現行標準采用計數器方法，分別對大于1μm和5μm 顆粒進行控制; 而USP35則采用光阻法對大于5μm顆粒的重量百分比含量進行控制。
      方法一：采用動態光散射或者米氏散射原理測試脂肪乳平均粒徑(MDD)，規定強度徑 Int-Weight不得超過500nm；
      方法二：采用光阻法(Light Obscuration)測得PFAT5值：統計1.8μm-50μm的脂肪乳顆粒體積在油相體積中的比例。測試三次，PFAT5值不得超過0.05%。
      3. 檢測方法
      目前市場主流的乳粒分析儀主要有BECKMAN COULTER計數器、PSS380&780APS激光粒度測定儀以及MALVER N2000 激光粒度測定儀。
      1）電阻法：BECKMAN COULTER計數器測定原理為電阻法。當一個顆粒穿過小孔時，在感應區中一個類似體積的電解液被該顆粒所置換。小孔所產生的通過電解液的電流流動的阻力就改變了，這種阻力上的改變以一個脈沖的形式測量。計數的脈沖數量與穿過小孔的顆粒的實際數量直接相關。因此可以通過脈沖數量計算通過小孔的粒子數。英國藥典丙泊酚脂肪乳注射液項下采用該方法。該法優點是分辨率高測量速度快，重復性好，缺點是容易發生堵孔故障，需要根據測定粒子的大小更換小孔管等。
      2）動態光散射：PSS 380 激 光 粒 度 測 定 儀 采 用 動 態 光 散 射 ( dynamic light scattering) 原理。測量的依據是粒子的布朗運動導致光強的波動，微小粒子懸浮在液體中會無規則地運動， 布朗運動的速度依賴于粒子的大小和媒體粘度，粒子越小，媒體粘度越小，布朗運動越快。光通過膠體時，粒子會將光散射， 在一定角度下可以檢測到光信號，所檢測到的信號是多個散射光子疊加后的結果。通過光強波動變化和光強相關函數計算出粒徑及其分布。
      3）光阻法：當有一定微粒的液體流經一狹長檢測區時，與檢測區垂直的入射光被微粒所阻擋，產生一定程度的遮光現象，從而投影在光電接收器件上的透射光強度會有所減弱，傳感器輸出的脈沖信號大小與阻擋微粒的截面積成正比，不同截面積的粒子產生不 同的輸出信號．經計算機進行數據處理后。給出所測粒徑的分布結果。粒徑測量范圍可達2- 400 um。當測量光源采用激光光源時．入射光強度會有所增加，可以提高檢測分辨率。
      4）經典光散射：MALVERN 2000激光粒度測定儀采用經典光散射原理， 測量的依據是米氏散射理論和弗朗霍夫近似理論，建立在一定的理論和數學模型之上，測得的結果是按照光強信號與角度的函數關系推算得到的顆粒群體的相對粒徑分布。若乳粒中大于
5μm的乳粒確實存在但相對于整體來說含量很低的時候， 使用激光粒度測定儀可能因為無法得到有效的光強信號而誤以為沒有大粒子。該法測定結果受3個參數影響，分別是折射率，遮光度及吸收率。
      4. 結論
      目前市場基于單顆粒光傳感技術的光阻法( LO /SPOP) 測定大粒子具有明顯的優勢，通過光學設備對不透光的粒子進行測定，可直接測定樣品，結果較為直接和直觀; 而電阻法需要添加電解質，通過顆粒帶電荷的多少來判斷，并通過折算，因此相對來說較為復雜，而且電解質可能會使乳粒聚集，測得的結果可能比光阻法高，從而影響判斷。
      乳粒的大小與粒徑分布決定了脂肪乳注射液的物理穩定性、臨床安全性和有效性， 是一項重要的質控指標， 通過本研究結果的探討希望能引起相關質量標準制定和監管部門的重視，增修訂相關質量標準，*藥典附錄， 以真正能達到評價產品質量的目的，并能促進相應的生產和工藝改進， 提高該類產品的質量水平。